标签: 甲基化 特异性 PCR
DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它是由DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶(mC)的一种反应,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是**存在的化学性修饰碱基。
DNA
亚硫酸氢钠、氢醌、石蜡油、乙醇
水浴锅、PCR仪
1. 在50 μl 体系中,DNA(2~5 μg)经NaOH(终浓度值0.2 mol/L)在37℃变性10 Min。 2. 对于ng级别的人基因组DNA,在进行修饰前加入2μg蛙鱼精DNA为载体。
3. 加入30 μl 刚配制好的10 mmo/L 氢醌与520/1的40.5%亚硫酸氢钠混匀。 4. 然后用石蜡油隔绝空气的条件下,避光在50%温育16 h。
5. 修饰后的DNA过WizerdDNA纯化柱,用50/1 L 水洗脱。 6. 室温下用NaOH(终浓度为0.3 mol/L)修饰5 min,之后用乙醇沉淀。
7. DNA溶于20 μl 水中,立即使用或在-20℃保存。
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